细胞转染必看的常见问题盘点!!!

🔍如何选择合适的转染方法？ 目前细胞转染主要有物理、化学和生物三类方法。物理转染需要特定仪器、耗材及充分的转染参数测试，才能获得较好的转染效果，一般实验室无法满足物理转染的硬件要求；化学转染是目前较为通用的一种方法，其凭借价格便宜、操作简单而被广泛使用；但部分类型细胞对化学转染不敏感，转染效率低，此类细胞可尝试生物转染方法，也就是通过病毒进行转染。 🔍2.为什么细胞转染效率不高？ 🔬细胞类型和状态：转染试剂对不同细胞的转染效率不尽相同；转染前细胞状态对转染效率影响较大，此外，细胞密度也会影响转染效率。 🔬转染试剂使用量：转染试剂用量过多或过少都可能影响转染效果，可根据说明书推荐的使用量进一步梯度摸索，确定目标细胞的最佳转染条件。 🔬核酸质量：使用的DNA或RNA质量不佳（如降解或污染）会影响转染效率。 🔬转染操作：例如制备转染复合物时孵育时间过长、转染后的细胞孵育时间不够等都可能导致效率下降。 🔍配制转染复合物时一定要用无血清培养基吗？ 通常在准备核酸和转染试剂稀释液时，建议使用无血清的培养基或转染试剂自带的组分。因为血清中含有大量的蛋白质，在转染过程中，蛋白质可能干扰阳离子脂质体/聚合物对核酸的吸附，影响转染效率。现在市售的部分转染试剂进行了一些改进，可以在转染时使用含血清的培养基，所以配制转染复合物时，可根据使用的具体转染试剂说明书，选择是否使用无血清培养基。 🔍电转后细胞死亡率高，如何调整优化？ 🔬细胞状态：细胞电转前，保证细胞生长状态良好，排除细胞污染情况。 🔬细胞密度：确保电转细胞的密度适中，细胞密度过高或过低都可能影响转染效果和细胞存活率。 🔬电转参数：优化电压和脉冲次数，针对目标细胞，确定最佳的电转参数。 🔬电转缓冲液：使用合适的电转缓冲液，确保能够有效导电，同时减少细胞损伤。 🔍转染了抗性基因的细胞加药筛选后，为什么都死了？ 🔬加药时间：细胞在转染带抗性基因的质粒后，需要24-48 h表达抗性基因，避免过早加入药物进行筛选，一般建议转染48 h后再加药，具体时间可以预实验摸索下。 🔬加药浓度：若药物浓度设置过高，超过了抗性基因能够应对的范围，导致即使转染了抗性基因，细胞也无法存活。 🔬抗性基因：抗性基因选择错误或转染过程中抗性基因发生突变或丢失，都会导致细胞抗性功能丧失。