无敌舰队以令人吃惊的速度在加的斯北边的圣卢卡尔港和里斯本港集结，出发日期定在10月下旬。新的无敌舰队由百余艘大小战船组成。其中主力是包括“12门徒”在内的30艘加里昂船。预定运载集结在西班牙和荷兰的9000名西班牙士兵和3000名葡萄牙士兵，途中再从法兰西的洛里昂港增补若干士兵。这支舰队虽然是前后5支无敌舰队中规模最小的，但为这次远征所筹措的粮食和军需品数量却非常浩大。 而英国在1595年从法国撤出军队后的三年里，又发动了三次与西班牙的大规模海上战争。首先出台的是德雷克的美洲冒险计划。这一计划遭到德雷克等人的强烈反对，他们声称，如果计划改变，女王将负担一切费用，包括船只、供应、步兵和水兵的薪饷。女王不得已于8月批准德雷克的计划，船队由6艘王家船只和13艘商船组成，女王负责2/3费用，其它由总指挥德雷克和霍金斯及支持者承担。由于德雷克与霍金斯间的争吵以及德雷克指挥上的失误，远航没取得任何收获，两人都病死在途中。
