万能的，帮我推给做酶活的大佬
淘淘科研废物
2025-11-26 00:08:13
蛋白纯化 纯度够了，酶活 酶活不行，纯化过程中影响酶活的因素有哪些？
[赞R]看到下面很多朋友们咨询纯化方案，其实没有固定的纯化方案，都是在不断摸索，下面简单分享一下
纯化方案：
1⃣️样品准备：
首先收集的菌体沉淀用亲和层析buffer重悬，接着进行破碎—超声破碎或者高压破碎，然后进行离心，收集上清液（可溶性表达收集上清），注意⚠️为了防止堵塞柱子，最好过滤一下上清液，这就是你的实验样品。
2⃣️AKTA 纯化：
制备好样品后，就开始进行纯化操作了，常用的纯化设备就是AKTA了，一般常用亲和层析镍柱结合阴阳离子交换层析柱，在纯化前，提前处理好柱子，然后上样-漂洗-洗脱就可以了。
3⃣️透析：
纯化后的样品所处的环境并不是蛋白最适环境，因此要进行换液，换液常用的方法就是透析或者超滤浓缩了，我的样品比较多，因此选用透析方法进行换液。
4⃣️储酶：
透析完成后，就进行最后一步储酶，计算好蛋白浓度，添加一些去垢剂，保护剂等等，就可以去测酶活了。
0
阅读：0
