常见凋亡检测试剂盒的检测原理🔬

🔍一、Annexin V凋亡检测试剂盒检测原理：Annexin V是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸（PS）有高度亲和力。在正常细胞中，PS通常位于细胞膜内侧。然而，当细胞发生凋亡时，细胞膜的通透性会发生变化，细胞膜内侧的PS部分外翻，暴露到细胞膜外侧。Annexin V可通过与凋亡早期细胞胞外翻的PS结合，从而识别凋亡细胞。为了更便于检测，将Annexin V标记上荧光染料，可通过流式细胞仪或荧光显微镜等设备检测到带有荧光的凋亡细胞。细胞核染料（PI、DAPI、7-AAD）可与双链DNA特异性结合，并产生强烈的荧光。正常情况下大分子的核染料是无法透过细胞膜，由于凋亡晚期或坏死细胞膜丧失完整性，细胞核染料可进入细胞内对DNA进行染色，与Annexin V搭配使用，可区分处于不同凋亡时期的细胞。 🔍二、TUNEL凋亡检测试剂盒检测原理：在细胞凋亡的晚期，染色体DNA双链断裂产生大量的粘性3'-OH末端。在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）的作用下，脱氧核糖核苷酸与荧光素等标记物形成的衍生物可以被标记到断裂DNA的3'-末端，从而进行凋亡细胞的检测。 🔍三、Caspase活性检测试剂盒检测原理：Caspase是一个蛋白酶家族，通常以无活性的酶原形式存在于细胞质中。活化的Caspase会破坏一些重要的胞内蛋白，从而引发凋亡的发生。将Caspase序列特异性的多肽酶偶联至黄色基团pNA作为底物，当Caspase被活化后，它能够剪切这个底物，释放出游离的黄色基团。通过酶标仪或分光光度计测定这些黄色基团的吸光值，就可以定量评估Caspase的活性，从而间接地监测细胞凋亡的情况。 🔍四、线粒体膜电位(JC-1)检测试剂盒检测原理：在正常细胞中，线粒体膜电位通常较高，JC-1主要在线粒体基质中聚集，以聚合体的形式存在，可产生红色荧光。然而，在细胞凋亡的早期阶段，线粒体膜电位会显著降低，导致JC-1无法在线粒体基质中积累，主要以单体形式存在，可产生绿色荧光。