外泌体分离指南：五大方法对比！(下)
普通生物
2025-09-30 23:01:37
💡尺寸排阻色谱法（Size-Exclusion Chromatography, SEC）
👉原理：利用多孔球状填料形成色谱柱，样本流经色谱柱时，不同尺寸的分子以不同速率流出。外泌体（30-150 nm）介于大蛋白与细胞外囊泡之间，可在特定洗脱体积内被收集。
👉分离步骤：
①样品预处理：去除大颗粒杂质，并适当浓缩样品以提高分离效率；
②色谱柱准备：装填适合外泌体分离的填料，使用缓冲液平衡柱体；
③样品上样：缓慢加载样品，避免扰动填料结构；
④洗脱与收集：按分级洗脱原则，优先收集外泌体富集部分；
⑤浓缩与纯化（可选）：使用超滤或二次离心等方法提高外泌体纯度。
👉优点：
温和无损伤，外泌体结构保持完整
操作简便，无需超速离心设备
分离效果较好，可去除蛋白污染
👉缺点：
纯度受限，仍可能残留其他细胞外囊泡
不适用于超大体积样本
💡聚合物沉淀法（Polymer Precipitation）
👉原理：利用聚合物（如聚乙二醇，PEG）降低外泌体表面水合层的溶解度，使其在低速离心条件下沉淀，从而从生物样本中分离外泌体
👉分离步骤：
样品预处理：去除大颗粒杂质，提高外泌体回收率；
添加聚合物溶液：充分混匀，低温孵育使外泌体沉淀；
离心收集：低速离心获取沉淀，去除上清；
重悬与纯化（可选）：使用缓冲液重悬，可结合其他纯化方法，如超滤、密度梯度离心等以提高纯度。
👉优点：
操作简单，时间短（< 4 h）
无需昂贵设备，适用于实验室常规分离
适合大体积样本（血清、尿液等）
👉缺点：
可能存在聚合物残留污染，影响下游实验（如蛋白分析）
共沉淀大量蛋白和其他颗粒，外泌体纯度较低
💡免疫亲和分离法（Immunoaffinity-Based Isolation）
👉原理：利用磁珠或亲和树脂为固相载体，表面固定CD9、CD63、CD81等外泌体特异性抗体，特异性结合并分离外泌体。
👉分离步骤：
样品预处理：去除大颗粒杂质，提高分离效率；
抗体结合：靶向外泌体表面标志物的抗体与固相载体偶联；
外泌体捕获：将样品与偶联抗体孵育，使外泌体特异性结合；
洗涤与洗脱：去除非特异性结合物，释放外泌体。
👉优点：
纯度极高，可用于特定类型外泌体富集
适用于高灵敏度分析（如qPCR、Western blot等）
👉缺点：
试剂昂贵，适合小规模研究
易丢失部分外泌体，回收率低
外泌体 外泌体分离 外泌体分离和纯化 普诺赛
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