培养CTLL-2细胞一定要注意的五件事！

🧪营养需求 CTLL-2细胞对营养需求高，因此建议使用优质胎牛血清培养；细胞状态较好时，细胞聚团较大，需注意观察培养基的营养消耗情况，可适当增加换液频次。 🧪IL-2依赖性 CTLL-2细胞为IL-2依赖型细胞，实验室培养该细胞时可以常备 IL-2。如果培养CTLL-2细胞过程中发现状态变差，出现散在细胞变多、生长停滞等情况，建议培养基中添加100 U/mL的IL-2，可以改善细胞状态。 🧪细胞复苏与状态调整 CTLL-2细胞冻存后再复苏，一般需要2周左右时间来调整状态。 1)细胞复苏后初期，细胞会呈单颗悬浮生长，并伴有较多的细胞碎片和黑点。在此期间，建议每2-3天进行一次补液或半换液操作，持续培养2~3周，以调整细胞状态。注意处理细胞时吹打轻柔，次数不要过多，以免对细胞造成损伤。此外，可在培养基中补充100 U/mL的IL-2，以促进细胞生长。 2)在细胞状态调整过程中，需要特别注意细胞密度的维持。建议将细胞密度控制在1×10^6 cells/mL左右。如果细胞复苏后密度较低，可以一次多复苏几支，后期调整过程中也可以视情况进行合瓶，以提高细胞培养密度。当细胞开始聚团时，通常意味着细胞状态正在逐步改善。请注意，在状态调整期间，细胞可能基本不生长，待细胞适应后才开始生长，这个过程需要耐心等待。 🧪细胞换液和传代 当细胞状态恢复正常，可以选择竖直培养瓶培养细胞，以维持细胞局部较高密度。细胞换液通常采取补液或半换液的方式，换液频率建议为2~3天一次。传代方式可采用直接分瓶或离心分瓶，需要注意的是，CTLL-2细胞不宜频繁离心，若选择离心传代，建议频率控制在一周一次。 🧪细胞冻存 在进行CTLL-2细胞冻存时，建议提高冻存密度。冻存时细胞密度不宜低于1×10^6 cells /支，推荐冻存密度5×10^6 cells/支。